Prinsip kerja pipet Pasteur adalah berdasarkan terutamanya pada-aliran terdorong graviti dan tindakan kapilari, digabungkan dengan kawalan manual pembezaan tekanan udara untuk memudahkan aspirasi dan pemindahan cecair.
Kawalan Sedutan Manual: Operator menggunakan sedutan pada hujung lebar pipet-sama ada secara lisan atau menggunakan mentol getah tambahan-untuk mencipta tekanan negatif dalam tiub, dengan itu menarik cecair ke hujung halus.
Graviti-Dispensing Didorong: Setelah sedutan dilepaskan, cecair mengalir keluar secara semula jadi di bawah pengaruh graviti; pendispensan juga boleh dibantu dengan memicit badan pipet secara perlahan atau mencondongkan bekas penerima.
Kebolehulangan Titisan: Dengan menentukur nisbah "titisan setiap mililiter," pipet membolehkan pemindahan kuantitatif anggaran, menjadikannya sesuai untuk prosedur yang memerlukan kebolehulangan dan bukannya ketepatan mutlak.
Jaminan Kemandulan: Sebelum digunakan, palam kapas boleh dimasukkan ke dalam hujung lebar dan disterilkan untuk mengelakkan pencemaran mikrob semasa mengendalikan-amalan yang biasa digunakan dalam eksperimen mikrobiologi.